muchas gracias por el video ! me sirvió mucho, quería saber cual es el video que comentas donde explicas el método de bradford que no lo encuentro, gracias
Si, puede ser lo mismo, solo son diferentes maneras de llamarlo. Lo que hay que diferenciar es el de corrida o separación (que es el que se usa para hacer la electroforesis en sí, que separa las diferentes bandas de proteínas) del buffer de transferencia, que se usa para pasar las proteínas desde el gel a la membrana. Esos dos sí tienen composiciones y usos diferentes. Si en tu bibliografía ves que le dicen buffer de separación al que se usa para hacer la electroforesis, entonces es lo mismo que el que yo llamo de corrida. 😉
El pH juega un papel crucial en el movimiento de las proteínas durante un Western blot, principalmente porque afecta la carga eléctrica de las proteínas y de la matriz del gel. Esto es fundamental para la separación de proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE, por sus siglas en inglés). Aquí te explico cómo influye: Las proteínas están formadas por aminoácidos con grupos cargados positivamente (básicos) o negativamente (ácidos). El pH del buffer afecta el grado de ionización de estos grupos. En un Western blot convencional con SDS-PAGE, las proteínas están recubiertas de dodecil sulfato de sodio (SDS), que les confiere una carga negativa uniforme, haciendo que su movimiento dependa casi exclusivamente de su tamaño molecular y no de su carga intrínseca. Si el pH no es adecuado, puede interferir con la ionización de los grupos aminoácidos o incluso afectar la eficiencia del SDS para unirse a las proteínas. Además, los geles de poliacrilamida funcionan óptimamente en rangos de pH específicos. Si el pH no está en el rango ideal, la matriz del gel no proporcionará el gradiente eléctrico necesario para separar correctamente las proteínas. Por otra parte, en electroforesis en gel nativo, donde las proteínas no se desnaturalizan ni se recubren con SDS, el pH tiene un impacto directo en la carga neta de la proteína. Si el pH es igual al punto isoeléctrico (pI) de la proteína, esta tendrá una carga neta neutra y no migrará en el gel. A pH menor que el pI, la proteína será positiva y migrará hacia el cátodo, mientras que a pH mayor que el pI será negativa y migrará hacia el ánodo. En resumen, en un Western blot convencional con SDS-PAGE, el pH afecta: 1. La capacidad del SDS para conferir una carga uniforme negativa a las proteínas. 2. La correcta formación del gradiente eléctrico en el gel. 3. La calidad de la apilación y resolución de las proteínas. Controlar el pH de los buffers es esencial para obtener resultados reproducibles y bandas bien definidas.
![Técnica ELISA [Teoría y Práctica]](http://i.ytimg.com/vi/56Pb3Dv32mA/mqdefault.jpg)
![Técnica ELISA [Teoría y Práctica]](/img/tr.png)
![ELECTROFORESIS de ADN en GEL de AGAROSA [TEÓRICO y PRÁCTICO]](http://i.ytimg.com/vi/i4l-rVZ3--8/mqdefault.jpg)
Claro y conciso la información, excelente sigan asi..
Muchísimas gracias!! 💪🏼😉
Brillante, sugerencia, estaria buenisimo decir porque se usa equis buffer o tal ph en las soluciones, abrazoo
Muchas gracias!! 🙂
Excelente video! muchas gracias!
🥰❤️
video excepcional
Muchas gracias!! 😊
buen video sobre todo el laboratorio virtual
Gracias! 😊
Muy buenos tus videos.
Felicidades 🎊🎊
Muchas gracias 😊☺️
Excelente!
muchas gracias
Gracias ☺️
Excelente vídeo saludos
Muchas gracias!
muchas gracias por el video ! me sirvió mucho, quería saber cual es el video que comentas donde explicas el método de bradford que no lo encuentro, gracias
Hola! Me alegro que te haya servido. El de Bradford aún no lo hice! Pero lo haré pronto. Gracias por recordarme 😅
Hola muy buen vídeo! Tengo una pregunta buffer de corrida y buffer de separación es lo mismo?
Si, puede ser lo mismo, solo son diferentes maneras de llamarlo. Lo que hay que diferenciar es el de corrida o separación (que es el que se usa para hacer la electroforesis en sí, que separa las diferentes bandas de proteínas) del buffer de transferencia, que se usa para pasar las proteínas desde el gel a la membrana. Esos dos sí tienen composiciones y usos diferentes.
Si en tu bibliografía ves que le dicen buffer de separación al que se usa para hacer la electroforesis, entonces es lo mismo que el que yo llamo de corrida. 😉
@@nutrimente Muchas gracias!!!
Buenass, me ha encantado el video pero no entiendo en que influye el pH en el movimiento de las proteínas.
El pH juega un papel crucial en el movimiento de las proteínas durante un Western blot, principalmente porque afecta la carga eléctrica de las proteínas y de la matriz del gel. Esto es fundamental para la separación de proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE, por sus siglas en inglés). Aquí te explico cómo influye:
Las proteínas están formadas por aminoácidos con grupos cargados positivamente (básicos) o negativamente (ácidos). El pH del buffer afecta el grado de ionización de estos grupos.
En un Western blot convencional con SDS-PAGE, las proteínas están recubiertas de dodecil sulfato de sodio (SDS), que les confiere una carga negativa uniforme, haciendo que su movimiento dependa casi exclusivamente de su tamaño molecular y no de su carga intrínseca.
Si el pH no es adecuado, puede interferir con la ionización de los grupos aminoácidos o incluso afectar la eficiencia del SDS para unirse a las proteínas.
Además, los geles de poliacrilamida funcionan óptimamente en rangos de pH específicos.
Si el pH no está en el rango ideal, la matriz del gel no proporcionará el gradiente eléctrico necesario para separar correctamente las proteínas.
Por otra parte, en electroforesis en gel nativo, donde las proteínas no se desnaturalizan ni se recubren con SDS, el pH tiene un impacto directo en la carga neta de la proteína.
Si el pH es igual al punto isoeléctrico (pI) de la proteína, esta tendrá una carga neta neutra y no migrará en el gel. A pH menor que el pI, la proteína será positiva y migrará hacia el cátodo, mientras que a pH mayor que el pI será negativa y migrará hacia el ánodo.
En resumen, en un Western blot convencional con SDS-PAGE, el pH afecta:
1. La capacidad del SDS para conferir una carga uniforme negativa a las proteínas.
2. La correcta formación del gradiente eléctrico en el gel.
3. La calidad de la apilación y resolución de las proteínas.
Controlar el pH de los buffers es esencial para obtener resultados reproducibles y bandas bien definidas.
muchísimas gracias de verdad❤❤
Como o donde se obtiene el mix acrilamida?
Se compra en empresas que venden insumos de laboratorio
excelente! lo unico malo la música de fondo que molesta, el resto impecable, gracias!
Muchas gracias!!
👍
Saquen ideas de como hacer una maqueta de esta cosa
Me aburro, al parecer si tiene buena información. Gracias.
Gracias!!