Антон, спасибо вам огромное за труд! Наконец-то многое стало понятно! Когда читаешь книги, разобраться самой довольно сложно. Моя благодарность безгранична!
😆у меня сейчас как раз такая же проблема с сорбиновой кислотой! Пик с горбом пошёл. Только вот я не использую предколонку для этого метода… неужели придётся менять колонку? Либо нужно как-то по особенному ее помыть?
Сначала нужно переприготовить буфер и убедиться, что pH < pKa как минимум на единицу, если не поможет, нужно промыть колонку перевернув ее на низком токе ПФ, затем перевернуть обратно и снова промыть на низком токе, но чуть дольше - должно помочь
Презентация drive.google.com/file/d/1Ss3jsxSPp-D4lZeAwolsyKuE-jg4SRk_/view?usp=sharing ВЭЖХ. Часть 2. th-cam.com/video/q2IS79Cj1WY/w-d-xo.html Тайм-коды: 00:00 Вступление и план на видео 01:18 Общая классификация вариантов ВЭЖХ 02:18 Адсорбционная хроматография 05:03 Нормально-фазовая хроматография 06:28 HILIC гидрофильная хроматография 08:36 Обращенно-фазовая хроматография 10:15 Рычаги влияния на разрешение пиков в ОФ-ВЭЖХ 19:33 HPLC и UPLC 23:04 Схема ВЭЖХ хроматографа 25:53 Аспекты ВЭЖХ элюентов. Требования и подготовка 55:11 Сорбенты и колонки в ВЭЖХ Дополнительные ссылки: Образовательная группа Kemister: vk.com/kemisters Плейлист "Разделительные методы" th-cam.com/play/PL_oqxSpsa5FeCAmbKH2KC598oxpq1rLGn.html Лекция Введение в хроматографию th-cam.com/video/IokWRBnVT4I/w-d-xo.html Лекция про ТСХ (Планарная хроматография) th-cam.com/video/h6HUMTbQtAs/w-d-xo.html Лекция про Колоночную хроматографию низкого давления th-cam.com/video/19SLwtCp3wY/w-d-xo.html Skype-лекция Основы хроматографии. Введение в газовую хроматографию th-cam.com/video/XYD8K73BNyg/w-d-xo.html
Добрый день! У вас отличные лекции, недавно случайно нашла ваш канал, смотрю все по очереди, сама работаю в контроле качестве на производстве биотехнологических препаратов. Очень бы хотелось послушать похожую лекцию от вас о капиллярном электрофорезе и его видах)
Метанол смешивается с гексаном до 22 об% при комнатной температуре (25 oC), при 45 oC - полное смешивание. Обычно на хроматографе стоит термостат, который ставится минимум 30-35 oC, а элюент генерируется in-line, да и часто метанола слишком много не нужно добавлять в элюент (до 10-15 об%).
Пруф 2 (правда там мольные отношения, то бишь массовые) chemistry.stackexchange.com/questions/153614/miscibility-gap-of-heptane-methanol-mixture@@007-n4n
Антон, вижу Вы профи по ВЭЖХ. У меня в лаборатории грузом лежит прибор от Агилент. Я не знаю принцип работы и последовательность загрузки прогграммы на компьютер т.к. рабочий стол или интерфейс на английском языке. Вы не могли бы показать на примере показать загрузку данных на компьютер и обработку информации, заранее спасибо
Здравствуйте, дело в том, что у каждого прибора своя программа и нюансы работы отличаются (даже на разных версиях). Более того с программами ВЭЖХ Agilent я не работал. Возможно, если будут более конкретные вопросы то смогу ответить.
Недостаток ортофосфорной кислоты - очень быстро портится элюент, либо постоянно готовить малыми порциями, либо добавлять в него азид натрия или ацетонитрил.
Я обычно с ортофосфорной к-той готовлю р-р с pH 3.7-3.0, при таком pH в воде ничего не развивается. Азид натрия - хорошая вещь, но на 210 нм он поглощает + подщелачивает pH, что будет влиять на сорбцию оснований и кислот, с ним главное не переборщить (100 мг/л достаточно). Ацетонитрил в водном компоненте элюента будет снижать удерживание (нужно его минимум 10-15 %), будет сложно рассчитать итоговое содержание ацетонитрила в смеси, например, для написания статей (при генерации элюента in-line в смесителе) + трудности с градиентом и элюцией слабоудерживаемых компонентов, таких как кофеин.
@@analist-3000 не знаю, у нас рабочий рр рН 2.5, в фосфорной через неделю серые хлопья. С муравьиной - нет, с ТФУ и ТХУ - нет, а вот с ней есть. Бактерии любят фосфаты, видимо. Насчёт ацетонитрила - если градиент начинается с 10 % ацн, то стартовать с 100%А (ацн в растворе уже есть 10%). Раньше я просто в градиенте вычитал 10% из В, то есть если в 20 мин ацн должно быть 40%, то прописывал В - 30%. Сейчас задумался, это возможно ошибка.
@@mrKek48 , что-то тут не то, при pH 2.5 99 % бактерий не растут, может что-то с pH-метром? В ортофосфорной никогда ничего не росло при таком pH, только в ацетатном буфере с pH = 4.1 проростало через неделю. Если у меня зарастает банка, то я после многократных промывок водой заливаю азотную кислоту (40-50 мл на литровую бутыль) и выдерживаю какое-то время, потом сливаю азотку в спец баночку и промываюсь от азотки не менее 7 раз водой в т.ч. в конце 2-3 раза свеженькой профильтрованной водой особой чистоты. А вообще воду перед приготовлением буфера нужно еще фильтровать через мембранный фильтр 0.45-0.22 мкм. Такая фильтрация должна снижать риск микробной контаминации, может еще в этом дело.
@@mrKek48 по поводу градиента. Допустим у нас есть компонент элюента А вода-ацетонитрил 90:10 и компонент элюента B 100 % ACN. Тогда, если мы начинаем градиент со 100 % А, то у нас по факту 10 % ACN 90 % воды - тут все просто, но вот когда начинаются смешения, то тут уже расчет немного усложняется. Допустим у нас 50 % А и 50 % B, тогда ацетонитрила в смеси будет 55 % (10*0.5 + 100*0.5). Проценты, конечно, объемные.
@@analist-3000 растворы фильтруем вакуум фильтром 0,45, это обязательная процедура, но уже после растворения кислот и подгона рН. Вода бидистиллированная, другой к сожалению нет. Кстати в приёмную бутыль она стекает по полиэтиленовому шлангу, как считаете, может его заменить на силикон? РН метр проверю, честно говоря, раньше думал, что +- 0.1 рН это незначительно. Ваши лекции напомнили об аккуратности, спасибо. И про фильтрацию элюентов шприцом и мозоли, это да, подтверждаю, так и было)).
![[Запись 2022 г] Введение в хроматографию, основы газовой хроматографии](http://i.ytimg.com/vi/XYD8K73BNyg/mqdefault.jpg)
Антон, спасибо вам огромное за труд! Наконец-то многое стало понятно! Когда читаешь книги, разобраться самой довольно сложно. Моя благодарность безгранична!
😆у меня сейчас как раз такая же проблема с сорбиновой кислотой! Пик с горбом пошёл. Только вот я не использую предколонку для этого метода… неужели придётся менять колонку? Либо нужно как-то по особенному ее помыть?
Сначала нужно переприготовить буфер и убедиться, что pH < pKa как минимум на единицу, если не поможет, нужно промыть колонку перевернув ее на низком токе ПФ, затем перевернуть обратно и снова промыть на низком токе, но чуть дольше - должно помочь
@@analist-3000 я попробую, спасибо за совет!
Здравствуйте. Как у вас дела с пиком сорбиновой кислоты?
Доступно и понятно. Спасибо за видео!
Рад стараться! )
Антон, спасибо за подробное видео. Кстати, я в своё время работала в Институте качества)
Ярославском? :)
Спасибо большое!
Пожалуйста )
Презентация drive.google.com/file/d/1Ss3jsxSPp-D4lZeAwolsyKuE-jg4SRk_/view?usp=sharing
ВЭЖХ. Часть 2. th-cam.com/video/q2IS79Cj1WY/w-d-xo.html
Тайм-коды:
00:00 Вступление и план на видео
01:18 Общая классификация вариантов ВЭЖХ
02:18 Адсорбционная хроматография
05:03 Нормально-фазовая хроматография
06:28 HILIC гидрофильная хроматография
08:36 Обращенно-фазовая хроматография
10:15 Рычаги влияния на разрешение пиков в ОФ-ВЭЖХ
19:33 HPLC и UPLC
23:04 Схема ВЭЖХ хроматографа
25:53 Аспекты ВЭЖХ элюентов. Требования и подготовка
55:11 Сорбенты и колонки в ВЭЖХ
Дополнительные ссылки:
Образовательная группа Kemister: vk.com/kemisters
Плейлист "Разделительные методы" th-cam.com/play/PL_oqxSpsa5FeCAmbKH2KC598oxpq1rLGn.html
Лекция Введение в хроматографию th-cam.com/video/IokWRBnVT4I/w-d-xo.html
Лекция про ТСХ (Планарная хроматография) th-cam.com/video/h6HUMTbQtAs/w-d-xo.html
Лекция про Колоночную хроматографию низкого давления th-cam.com/video/19SLwtCp3wY/w-d-xo.html
Skype-лекция Основы хроматографии. Введение в газовую хроматографию th-cam.com/video/XYD8K73BNyg/w-d-xo.html
Добрый день! У вас отличные лекции, недавно случайно нашла ваш канал, смотрю все по очереди, сама работаю в контроле качестве на производстве биотехнологических препаратов.
Очень бы хотелось послушать похожую лекцию от вас о капиллярном электрофорезе и его видах)
Да без проблем :) th-cam.com/video/7zQAE0c9Bjo/w-d-xo.html
Очень полезно, спасибо.
Пожалуйста. Наличие комментариев мотивирует :)
По поводу фазового коллапса хотел спросить, это подобие быстрой коагуляции т.е.слипание частиц в большие агрегаты?
Здравствуйте, вот на этом форуме подробно описали www.anchem.ru/forum/read.asp?id=10957
Нет это не коагуляция.
Спасибо большое ))))
Как метанол может смешиваться с гексанои 3:12?
Метанол смешивается с гексаном до 22 об% при комнатной температуре (25 oC), при 45 oC - полное смешивание. Обычно на хроматографе стоит термостат, который ставится минимум 30-35 oC, а элюент генерируется in-line, да и часто метанола слишком много не нужно добавлять в элюент (до 10-15 об%).
@@analist-3000, тогда бы в конденсате и нефти был метанол. До 2 % мас. метанол и вода растворяется в углеводородах
Пруф 1 kilomentor.blogspot.com/2023/05/hexane-methanol-as-reaction-medium.html#:~:text=The%20azeotropic%20mixture%20of%20hexane,and%2023.9%25%20methanol%20by%20weight@@007-n4n
Пруф 2 (правда там мольные отношения, то бишь массовые) chemistry.stackexchange.com/questions/153614/miscibility-gap-of-heptane-methanol-mixture@@007-n4n
Мольные и массовые % разные вещи
Спасибо большое
Пожалуйста! Постараюсь не затягивать со второй частью.
Спасибо большое очень полезно
Пожалуйста, заходите еще
Спасибо!!!
Спасибо за активность. Приятно, что под видео нет пустоты :)
спасибо очень интересно и полезно
Пожалуйста )
Спасибо! Как скоро выйдет вторая часть?
Спасибо за интерес к моей деятельности. Сейчас разгребу завал на работе и завтра постараюсь оформить видео-материал :)
Уже готово th-cam.com/video/q2IS79Cj1WY/w-d-xo.html
Антон, вижу Вы профи по ВЭЖХ. У меня в лаборатории грузом лежит прибор от Агилент. Я не знаю принцип работы и последовательность загрузки прогграммы на компьютер т.к. рабочий стол или интерфейс на английском языке. Вы не могли бы показать на примере показать загрузку данных на компьютер и обработку информации, заранее спасибо
Здравствуйте, дело в том, что у каждого прибора своя программа и нюансы работы отличаются (даже на разных версиях). Более того с программами ВЭЖХ Agilent я не работал. Возможно, если будут более конкретные вопросы то смогу ответить.
Недостаток ортофосфорной кислоты - очень быстро портится элюент, либо постоянно готовить малыми порциями, либо добавлять в него азид натрия или ацетонитрил.
Я обычно с ортофосфорной к-той готовлю р-р с pH 3.7-3.0, при таком pH в воде ничего не развивается. Азид натрия - хорошая вещь, но на 210 нм он поглощает + подщелачивает pH, что будет влиять на сорбцию оснований и кислот, с ним главное не переборщить (100 мг/л достаточно). Ацетонитрил в водном компоненте элюента будет снижать удерживание (нужно его минимум 10-15 %), будет сложно рассчитать итоговое содержание ацетонитрила в смеси, например, для написания статей (при генерации элюента in-line в смесителе) + трудности с градиентом и элюцией слабоудерживаемых компонентов, таких как кофеин.
@@analist-3000 не знаю, у нас рабочий рр рН 2.5, в фосфорной через неделю серые хлопья. С муравьиной - нет, с ТФУ и ТХУ - нет, а вот с ней есть. Бактерии любят фосфаты, видимо. Насчёт ацетонитрила - если градиент начинается с 10 % ацн, то стартовать с 100%А (ацн в растворе уже есть 10%). Раньше я просто в градиенте вычитал 10% из В, то есть если в 20 мин ацн должно быть 40%, то прописывал В - 30%. Сейчас задумался, это возможно ошибка.
@@mrKek48 , что-то тут не то, при pH 2.5 99 % бактерий не растут, может что-то с pH-метром? В ортофосфорной никогда ничего не росло при таком pH, только в ацетатном буфере с pH = 4.1 проростало через неделю. Если у меня зарастает банка, то я после многократных промывок водой заливаю азотную кислоту (40-50 мл на литровую бутыль) и выдерживаю какое-то время, потом сливаю азотку в спец баночку и промываюсь от азотки не менее 7 раз водой в т.ч. в конце 2-3 раза свеженькой профильтрованной водой особой чистоты. А вообще воду перед приготовлением буфера нужно еще фильтровать через мембранный фильтр 0.45-0.22 мкм. Такая фильтрация должна снижать риск микробной контаминации, может еще в этом дело.
@@mrKek48 по поводу градиента. Допустим у нас есть компонент элюента А вода-ацетонитрил 90:10 и компонент элюента B 100 % ACN. Тогда, если мы начинаем градиент со 100 % А, то у нас по факту 10 % ACN 90 % воды - тут все просто, но вот когда начинаются смешения, то тут уже расчет немного усложняется. Допустим у нас 50 % А и 50 % B, тогда ацетонитрила в смеси будет 55 % (10*0.5 + 100*0.5). Проценты, конечно, объемные.
@@analist-3000 растворы фильтруем вакуум фильтром 0,45, это обязательная процедура, но уже после растворения кислот и подгона рН. Вода бидистиллированная, другой к сожалению нет. Кстати в приёмную бутыль она стекает по полиэтиленовому шлангу, как считаете, может его заменить на силикон? РН метр проверю, честно говоря, раньше думал, что +- 0.1 рН это незначительно. Ваши лекции напомнили об аккуратности, спасибо. И про фильтрацию элюентов шприцом и мозоли, это да, подтверждаю, так и было)).
😊
Про растворители забавно, нам даже для hplc разрешают только lcms использовать😅 хотя честно не понимаю необходимости тратится
Интересно, а где такие требования предъявляют?
@@analist-3000 Бремен, Университет…
@@MariiaMikhailova от хорошей жизни поди :), мне вот на днях предколонку пришлось за свои деньги покупать, ждали три года безрезультатно.
@@analist-3000 ох, колонки дело не дешевое….
Кр3г
Вы это к чему?
Спасибо 🙏
Спасибо большое ))))
Пожалуйста