안녕하세요 이 동영상과 같은 방법으로 자연물에서 단백질 효소를 추출하는 실험을 진행 중입니다. 혹시 dialysis를 위한 membrane, dialysate buffer는 어떤 기준에 맞춰 구매하는 것이 좋을까요.그리고 효소로 위 실험을 진행했을 때 변성 가능성이 있을까요? 마지막으로 투석을 하는 이유에 대해 알려주신다면 감사하겠습니다.
안녕하세요. 질문 감사드립니다. Dialysis를 위한 멤브레인과 dialysate buffer를 선택할 때 몇 가지 고려해야 할 점이 있어요. 멤브레인 선택 : 먼저, 멤브레인의 분자량 컷오프(MWCO)를 잘 확인해야 합니다. 연구대상 단백질 분자의 크기를 기준으로 적절한 컷오프를 가진 멤브레인을 선택하면 됩니다. 그리고 멤브레인의 재질도 고려해 볼 필요가 있습니다. 각 재질별 화학적 안정성이나 생체 적합성도 고려하는 게 좋습니다. Dialysate buffer 선택: 버퍼의 pH와 이온 농도를 고려해야 합니다. Buffer는 효소의 활성에 큰 영향을 미치기 때문에 실험에 맞는 조건을 유지할 수 있는 버퍼를 선택하는 게 중요하죠. Enzyme 변성 가능성: dialysis 과정에서 효소가 변성될 가능성도 있으니 주의해야 합니다. 높은 온도나 pH 변화, dialysate의 조성에 따라 효소가 변형될 수 있으니까요. 그래서 효소가 안정적으로 유지될 수 있는 최적 조건에서 실험하는 게 좋습니다. Dialysis의 이유: dialysis를 하는 이유 다양합니다. 주로 이온 등의 불순물을 제거하고, 용액의 농도를 조절하며, 효소 실험에서 최적의 반응 조건을 유지하기 위해 불필요한 물질을 제거하고 새로운 버퍼로 교환하는 등 다음단계의 연구에 필요한 작업이라고 생각하시면 됩니다. 수행하시는 연구 모두 좋은 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^
안녕하세요, 질문 감사드립니다. Dialysis 할때 membrane내에 용액을 절반정도 채우고 나머지 50%의 부분이 팽창하며 버퍼 교환이 발생해야 하는데, 이때 membrane이 회전을 하게 되면 꼬이면서 비어있는 부분이 팽창하지 못합니다. 그리고 심한경우 membrane이 찢어지는 일도 간혹 발생할 수 있습니다. 결국 dialysis 효율이 감소되고 심한경우 membrane 손상이 발생할 수 있어 회전을 시키지 않도록 고정시키는 것입니다. 수행하시는 연구 모두 좋은 성과 거두시기를 기원 드립니다. ^^
안녕하세요, 영상 시청해주셔서 감사합니다. 연구자 마다 의견이 상이할 수 있으나, sample buffer와 dialysis buffer를 다르게 사용할 경우 buffer간 이온의 농도차이가 발생하여 dialysis 효율이 좋아지는 경우가 있습니다. 저희 실험실은 이러한 의견들을 참조하고 경험을 기반으로 이와같은 방법을 주로 사용하고 있습니다. 서로 다른 버퍼가 아닌 동일 버퍼를 사용하는 실험실도 많으므로, 저희 방법을 "여러 가지 종류 중 한가지 실험방법"으로 봐주시면 좋겠습니다. 수행하시는 연구에서 모두 좋은 결과 얻으시기를 기원드립니다. 감사합니다.
Thanks for watching. Some methods use distilled water to change the pH. However, in my personal opinion, this is not the best method. Because buffers contain various ions for pH control and protein structure stability or activity. If you have to use distilled water for dialysis, I think there will be more variables and things to be careful of, such as protein denaturation and protein loss.
Thank you for watching our video. The RT-qPCR video you mentioned is linked below. Please let me know if you have any additional questions. I wish you all the best in your research. RNA isolation by TRIzol th-cam.com/video/l_52wXWS3pM/w-d-xo.html Real-time PCR th-cam.com/video/r_V3Itf7jRw/w-d-xo.html
@@조하성-p2d안녕하세요, 시청해 주셔서 감사드립니다. 실험 기법은 각 연구자 마다 경험 및 결과 만족도에 의해 다양하게 달라질 수 있습니다. 저희 영상의 내용도 그와 동일하다고 이해해 주시면 좋겠습니다. 보통 dialysis할때 동일 buffer를 사용하여 salt 제거를 하는 방법도 있으나, 단백질 추출시 사용한 buffer와 dialysis할때 사용하는 buffer를 서로 다르게 만들어 사용하는 방법이 있습니다. 동일 buffer를 사용하면 salting out 등을 통해 확보된 단백질에서 salt가 제거되는데, buffer를 서로 다르게 사용하면 salt를 포함한 buffer조성물이 같이 이동하며 salt를 더 빠르고 깔끔하게 제거할 수 있다는 이론도 있습니다. 저희 실험실은 그 경험이 있기 때문에 이렇게 방법을 정해서 사용하고 있습니다. 그렇지만 kinase 등의 연구 등 phosphate의 변화가 있으면 좋지 않은 경우 등, 실험 목적에 따라 동일 buffer를 사용하거나, lysosome 단백질 연구 등을 위해 pH를 낮춰 dialysis buffer를 제조하는 등 변화를 주는 방법도 사용하고 있습니다. 두가 질문에 답이 되었다면 좋겠습니다. 추가 궁금사항이 있으시면 언제라도 질문 주시면 감사하겠습니다. 수행하시는 연구 모두에서 최고의 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^
정말 상세한 답변 감사합니다. 제가 단백질 추출을하고 salting out 으로 정제하는 연구를 진행하고 있습니다. 해당 영상으로 어떻게 마무리를 해야하는지 알겠어요! 제가 PBS buffer pH를 7.4 로 제조는 했는데 tris puffer제조를 어떻게 해야할지 고민중이라.. 동일하게 pH 을 만들어야할까요? 조언 부탁드리겠습니다!
@@조하성-p2d 안녕하세요 pH변화는 단백질의 net charge를 변화 시킬수 있으므로 세포내 소기관 중 pH가 상이한 곳의 단백질 연구를 위해서는 해당 pH를 선택하시는 것이 좋지만, 그렇지 않은 일반적 단백질의 경우 가장 보편적인 pH를 선택하시는 것이 좋겠지요. pH7.4로 PBS를 사용하신다면 그리고 일반적인 세포내 pH조건의 단백질 연구를 하신다면 Tris buffer 역시 pH를 7.4로 사용하시는 것이 좋다고 생각합니다. 하나하나 연구가 진행되면서 즐거운 결과들이 나오고, 그것을 기반으로 훌륭한 연구자가 되실 것이라 생각합니다. 좋은 결과 많이 도출되시기를 기원드립니다.
please if you can explain to me, why the mobile phases containing a concentration of ammonium sulfate promote the binding of many proteins to HIC columns??
Thanks for the question. HIC takes advantage of differences in the hydrophobicity of proteins to separate proteins. Proteins precipitated with ammonium sulfate, a solution with high ionic strength, are attached to the hydrophobic surface of the resin in the column as soon as they are injected into the column. And then, if the conditions are changed, the protein comes out of the column due to the difference in hydrophobicity strength. Currently, three theories have been proposed for the separation of substances by hydrophobicity through HIC. Van der Waals forces theory, salting out theory, thermodynamic theory. If you have any additional questions, feel free to ask. I wish you always in good health.
Thanks for watching our channel. We already upload English version of this video. Please find the link. I wish you have a great research result in every moment.
Can you plz guide me in one more thing? I have to use distilled water as a dialysate buffer then in this case what will be the sample buffer? Will there be some issue in using Tris HCl as a sample buffer against Distilled water or should use some other? Plz suggest me the better optn... Thnx
@@zainabsohail2781 Under normal conditions, if the dialysis buffer and the sample buffer are different, there is no problem with the dialysis itself. However, if the sample to be dialyzed is a protein, care must be taken as the structure of the protein may be denatured when distilled water meets the protein sample.
Excuse me, i want to advice from you about method dialysis in procedure. If i want to desalting by dialysis. How to prepare dialysis buffer ? In your clip that are buffer or buffer So i'm confuse because i'm not good for understand in your language. thank a millions for answer
Thank you for watching our video. In general, various types of dialysis buffers are available depending on the purpose. If you want to measure the enzyme activity by purifying protein, you can add Glycerol, KCl, EDTA, Dithiothreitol, etc. based on Tris-buffer. In addition, PBS buffer is prepared and used as a dialysis buffer when measuring simple protein content. The above image was made for the purpose of showing the basic method of dialysis and used PBS buffer. If you have any additional questions, please feel free to ask us. I hope your research goes well. Thank you.
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.htmlfeature=shared Thank you for watching. Here is the same video with English subtitles. I would appreciate it if you could check the link. I hope you always achieve good research results.
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.html Thank you for watching. We have already created and uploaded an English version of this video. Please check the address above. We wish you always good results.
An English version of the video has already been uploaded due to many people requesting it. I would appreciate it if you could check the link below. I wish you good success in all your research. th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.htmlfeature=shared
CDRT-tube영상을 시청하여 주셔서 감사합니다. Salting out(염석)은 물 또는 기타 용매에 녹아 있는 물질을 분리하는 방법을 지칭합니다. 용매와 반응하여 고르게 녹아있는 물질(용질)은 그 표면에 용매와 친한 성질이 있어서 용매 사이사이에 잘 분포하게 됩니다. 그러나 염(salt)를 투입할 경우 salt가 용매와 물질의 친화력을 방해하여 물질이 용매사이에 고르게 분포하지 못하게 되고, 결국 그 물질간에 결합을 하게 되어 사이즈가 커지면서 용매로 부터 분리됩니다. 이러한 반응을 일반적으로 염석이라고 지칭합니다. 혹시라도 궁금하신 점이 추가로 있으시면 언제든 질문 올려 주세요~
안녕하세요 이 동영상과 같은 방법으로 자연물에서 단백질 효소를 추출하는 실험을 진행 중입니다. 혹시 dialysis를 위한 membrane, dialysate buffer는 어떤 기준에 맞춰 구매하는 것이 좋을까요.그리고 효소로 위 실험을 진행했을 때 변성 가능성이 있을까요? 마지막으로 투석을 하는 이유에 대해 알려주신다면 감사하겠습니다.
안녕하세요. 질문 감사드립니다.
Dialysis를 위한 멤브레인과 dialysate buffer를 선택할 때 몇 가지 고려해야 할 점이 있어요.
멤브레인 선택 : 먼저, 멤브레인의 분자량 컷오프(MWCO)를 잘 확인해야 합니다. 연구대상 단백질 분자의 크기를 기준으로 적절한 컷오프를 가진 멤브레인을 선택하면 됩니다. 그리고 멤브레인의 재질도 고려해 볼 필요가 있습니다. 각 재질별 화학적 안정성이나 생체 적합성도 고려하는 게 좋습니다.
Dialysate buffer 선택: 버퍼의 pH와 이온 농도를 고려해야 합니다. Buffer는 효소의 활성에 큰 영향을 미치기 때문에 실험에 맞는 조건을 유지할 수 있는 버퍼를 선택하는 게 중요하죠.
Enzyme 변성 가능성: dialysis 과정에서 효소가 변성될 가능성도 있으니 주의해야 합니다. 높은 온도나 pH 변화, dialysate의 조성에 따라 효소가 변형될 수 있으니까요. 그래서 효소가 안정적으로 유지될 수 있는 최적 조건에서 실험하는 게 좋습니다.
Dialysis의 이유: dialysis를 하는 이유 다양합니다. 주로 이온 등의 불순물을 제거하고, 용액의 농도를 조절하며, 효소 실험에서 최적의 반응 조건을 유지하기 위해 불필요한 물질을 제거하고 새로운 버퍼로 교환하는 등 다음단계의 연구에 필요한 작업이라고 생각하시면 됩니다.
수행하시는 연구 모두 좋은 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^
영상 감사드립니다.
질문이 있는데, Membrane tube 를 회전 시키지 않고 고정하는 이유는 무엇인지 알수 있을까요?
안녕하세요, 질문 감사드립니다.
Dialysis 할때 membrane내에 용액을 절반정도 채우고 나머지 50%의 부분이 팽창하며 버퍼 교환이 발생해야 하는데, 이때 membrane이 회전을 하게 되면 꼬이면서 비어있는 부분이 팽창하지 못합니다. 그리고 심한경우 membrane이 찢어지는 일도 간혹 발생할 수 있습니다.
결국 dialysis 효율이 감소되고 심한경우 membrane 손상이 발생할 수 있어 회전을 시키지 않도록 고정시키는 것입니다.
수행하시는 연구 모두 좋은 성과 거두시기를 기원 드립니다. ^^
Thank you! This was the only useful video I could find about dialysis
Thank you so much for your comment. If you have any question, feel free to let us know. I wish you have a great research results.
안녕하세요 혹시 2:47 에서 sample buffer 와 dialysis buffer 는 다른 버퍼를 써야하는 이유가 있나요? 실험 설계중인데 같은 버퍼를 사용한 논문들이 종종 있어서요..
안녕하세요, 영상 시청해주셔서 감사합니다.
연구자 마다 의견이 상이할 수 있으나, sample buffer와 dialysis buffer를 다르게 사용할 경우 buffer간 이온의 농도차이가 발생하여 dialysis 효율이 좋아지는 경우가 있습니다.
저희 실험실은 이러한 의견들을 참조하고 경험을 기반으로 이와같은 방법을 주로 사용하고 있습니다.
서로 다른 버퍼가 아닌 동일 버퍼를 사용하는 실험실도 많으므로, 저희 방법을 "여러 가지 종류 중 한가지 실험방법"으로 봐주시면 좋겠습니다.
수행하시는 연구에서 모두 좋은 결과 얻으시기를 기원드립니다.
감사합니다.
@@CDRTtube 헉 친절한 답변 감사합니다 추운 겨울 감기 조심하세요!
Hi, thanks for video, i have GO dispersion ph 3 and i want to increase its ph to 6 by dialysis, can i use distilled water instead of buffer?
Thanks for watching.
Some methods use distilled water to change the pH. However, in my personal opinion, this is not the best method.
Because buffers contain various ions for pH control and protein structure stability or activity. If you have to use distilled water for dialysis, I think there will be more variables and things to be careful of, such as protein denaturation and protein loss.
Love it, very easy to understand yet very informative. Can you do a rt-qpcr video??
Thank you for watching our video. The RT-qPCR video you mentioned is linked below. Please let me know if you have any additional questions. I wish you all the best in your research.
RNA isolation by TRIzol
th-cam.com/video/l_52wXWS3pM/w-d-xo.html
Real-time PCR
th-cam.com/video/r_V3Itf7jRw/w-d-xo.html
안녕하세요. 해당 영상정보 정말 유익합니다! 궁금한게 좀 있어요! 왜 tris buffer 랑 PBS buffer를 따로 사용하셨는지? 두번째로는 트리스는 1몰 기준으로 제조된건가요? 답변부탁드릴게요! 감사합니다
tris 는 1M pH 7.2 기준으로 만들어진건가요?
@@조하성-p2d안녕하세요, 시청해 주셔서 감사드립니다.
실험 기법은 각 연구자 마다 경험 및 결과 만족도에 의해 다양하게 달라질 수 있습니다.
저희 영상의 내용도 그와 동일하다고 이해해 주시면 좋겠습니다.
보통 dialysis할때 동일 buffer를 사용하여 salt 제거를 하는 방법도 있으나, 단백질 추출시 사용한 buffer와 dialysis할때 사용하는 buffer를 서로 다르게 만들어 사용하는 방법이 있습니다.
동일 buffer를 사용하면 salting out 등을 통해 확보된 단백질에서 salt가 제거되는데, buffer를 서로 다르게 사용하면 salt를 포함한 buffer조성물이 같이 이동하며 salt를 더 빠르고 깔끔하게 제거할 수 있다는 이론도 있습니다. 저희 실험실은 그 경험이 있기 때문에 이렇게 방법을 정해서 사용하고 있습니다.
그렇지만 kinase 등의 연구 등 phosphate의 변화가 있으면 좋지 않은 경우 등, 실험 목적에 따라 동일 buffer를 사용하거나, lysosome 단백질 연구 등을 위해 pH를 낮춰 dialysis buffer를 제조하는 등 변화를 주는 방법도 사용하고 있습니다.
두가 질문에 답이 되었다면 좋겠습니다.
추가 궁금사항이 있으시면 언제라도 질문 주시면 감사하겠습니다.
수행하시는 연구 모두에서 최고의 성과 거두시기를 기원드립니다. ^^
정말 상세한 답변 감사합니다. 제가 단백질 추출을하고 salting out 으로 정제하는 연구를 진행하고 있습니다. 해당 영상으로 어떻게 마무리를 해야하는지 알겠어요! 제가 PBS buffer pH를 7.4 로 제조는 했는데 tris puffer제조를 어떻게 해야할지 고민중이라.. 동일하게 pH 을 만들어야할까요? 조언 부탁드리겠습니다!
@@조하성-p2d 안녕하세요
pH변화는 단백질의 net charge를 변화 시킬수 있으므로 세포내 소기관 중 pH가 상이한 곳의 단백질 연구를 위해서는 해당 pH를 선택하시는 것이 좋지만, 그렇지 않은 일반적 단백질의 경우 가장 보편적인 pH를 선택하시는 것이 좋겠지요. pH7.4로 PBS를 사용하신다면 그리고 일반적인 세포내 pH조건의 단백질 연구를 하신다면 Tris buffer 역시 pH를 7.4로 사용하시는 것이 좋다고 생각합니다.
하나하나 연구가 진행되면서 즐거운 결과들이 나오고, 그것을 기반으로 훌륭한 연구자가 되실 것이라 생각합니다. 좋은 결과 많이 도출되시기를 기원드립니다.
안녕하세요. 이번에 salting out에 대한 레포트를 작성하고 있는 대학생 입니다. 동영상 덕분에 더욱 이해가 잘 되었습니다 감사합니다. 혹시 실례가 안된다면 레포트 작성에 참고 할수 있을까해서 댓글 남겨봅니다.
영상 시청해주셔서 감사합니다
도움이 되셨다니 저희도 기쁩니다
레포트 작성에 영상 활용 하셔도 되세요~^^
TH-cam 규정상 영상 편집 재배포 등은 아마 안 될 겁니다
올라간 영상 그대로 링크를 잘 활용 하셔도 될 듯 하구요
감사합니다 ^^
please if you can explain to me, why the mobile phases containing a concentration of ammonium sulfate promote the binding of many proteins to HIC columns??
Thanks for the question.
HIC takes advantage of differences in the hydrophobicity of proteins to separate proteins.
Proteins precipitated with ammonium sulfate, a solution with high ionic strength, are attached to the hydrophobic surface of the resin in the column as soon as they are injected into the column.
And then, if the conditions are changed, the protein comes out of the column due to the difference in hydrophobicity strength.
Currently, three theories have been proposed for the separation of substances by hydrophobicity through HIC.
Van der Waals forces theory, salting out theory, thermodynamic theory.
If you have any additional questions, feel free to ask.
I wish you always in good health.
@@CDRTtube Thank you so much
@@Leen-ih8ql It's my pleasure. thank you.
Please translate it in english for me... I want to know the dialysis process right after precipitation but unable to understand the chemicals
Thanks for watching our channel.
We already upload English version of this video.
Please find the link.
I wish you have a great research result in every moment.
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.html
Thank you so much.
Can you plz guide me in one more thing? I have to use distilled water as a dialysate buffer then in this case what will be the sample buffer? Will there be some issue in using Tris HCl as a sample buffer against Distilled water or should use some other? Plz suggest me the better optn... Thnx
@@zainabsohail2781 Under normal conditions, if the dialysis buffer and the sample buffer are different, there is no problem with the dialysis itself.
However, if the sample to be dialyzed is a protein, care must be taken as the structure of the protein may be denatured when distilled water meets the protein sample.
Can u add subtitles in english? :"
Thanks for watching our video. later on I will try to put some English caption.
Which subtitle is this?
@@irocktheworld000 Thank you for your comment, This is Korean. Hope your research will going perfect.
Excuse me, i want to advice from you about method dialysis in procedure. If i want to desalting by dialysis. How to prepare dialysis buffer ? In your clip that are buffer or buffer So i'm confuse because i'm not good for understand in your language. thank a millions for answer
Thank you for watching our video. In general, various types of dialysis buffers are available depending on the purpose. If you want to measure the enzyme activity by purifying protein, you can add Glycerol, KCl, EDTA, Dithiothreitol, etc. based on Tris-buffer. In addition, PBS buffer is prepared and used as a dialysis buffer when measuring simple protein content. The above image was made for the purpose of showing the basic method of dialysis and used PBS buffer. If you have any additional questions, please feel free to ask us. I hope your research goes well. Thank you.
Thankyou so much, really help me
but I wish there is have english subtitle sis 🥹
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.htmlfeature=shared
Thank you for watching.
Here is the same video with English subtitles.
I would appreciate it if you could check the link.
I hope you always achieve good research results.
English language please
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.html
Thank you for watching.
We have already created and uploaded an English version of this video.
Please check the address above.
We wish you always good results.
Podrías agregarle subtítulos en español? :'(
No can do
Any one can translate it into English
Thank you for visiting our channel.
I will make the video subtitles in English later and upload it as a new video.
Thank you.
Hello, first of all pls you define in english languge . then we batter under stand this method
An English version of the video has already been uploaded due to many people requesting it.
I would appreciate it if you could check the link below.
I wish you good success in all your research.
th-cam.com/video/QvNP3bJPzrU/w-d-xo.htmlfeature=shared
감사합니다. 혹시.. 염석효과라는 slating out이 무엇인지 알수 있을까요?
CDRT-tube영상을 시청하여 주셔서 감사합니다.
Salting out(염석)은 물 또는 기타 용매에 녹아 있는 물질을 분리하는 방법을 지칭합니다.
용매와 반응하여 고르게 녹아있는 물질(용질)은 그 표면에 용매와 친한 성질이 있어서 용매 사이사이에 잘 분포하게 됩니다.
그러나 염(salt)를 투입할 경우 salt가 용매와 물질의 친화력을 방해하여 물질이 용매사이에 고르게 분포하지 못하게 되고, 결국 그 물질간에 결합을 하게 되어 사이즈가 커지면서 용매로 부터 분리됩니다.
이러한 반응을 일반적으로 염석이라고 지칭합니다.
혹시라도 궁금하신 점이 추가로 있으시면 언제든 질문 올려 주세요~